Purificación y caracterización de 6-PGD a partir de hígado de codorniz

En este estudio, se purificó la enzima 6-fosfogluconato deshidrogenasa (6PGD) a partir del hígado de codorniz mediante precipitación con sulfato amónico y métodos de cromatografía de afinidad con 2', 5'-ADP Sepharose 4B, con actividades específicas de 14,6 EU/mg, un rendimiento del 89% y 112 pliegues de purificación. La actividad enzimática se midió espectrofotométricamente a 340 nm. La pureza de la enzima se comprobó mediante SDS-PAGE. El peso molecular de la enzima purificada por el método SDS-PAGE se calculó en 44 KDa. La determinación de proteínas se realizó por el método de Bradford. Para la enzima se determinaron el pH óptimo (8,0), el pH estable (8,0), la fuerza iónica óptima (600 mM en Tris-HCl) y la temperatura óptima (60°C). Además, se calcularon los valores KM y Vmax para 6-fosfogluconato (6-PGA) y NADP+ como 0,058 y 0,0015 mM; 0,0078 y 0,057 EU/ml respectivamente.