Purificação e caracterização de 6-PGD a partir de fígado de codorniz

Neste estudo, a enzima 6-fosfogluconato desidrogenase (6PGD) foi purificada a partir do fígado de codorniz através da precipitação de sulfato de amónio, e 2', 5'-ADP métodos de cromatografia de afinidade Sepharose 4B, com actividades específicas 14,6 EU/mg, rendimento 89% e 112 dobra de purificação. A actividade enzimática foi medida espectrofotometricamente a 340 nm. A SDS-PAGE verificou a pureza da enzima. O peso molecular da enzima purificada pelo método SDS-PAGE foi calculado como sendo de 44 KDa. A determinação da proteína foi realizada pelo método de Bradford. Para a enzima pH óptimo (8,0), pH estável (8,0), foi determinada a força iónica óptima (600 mM em Tris-HCl), temperatura óptima (60°C). Além disso, os valores de KM e Vmax para 6-fosfogluconato (6-PGA) e NADP+ foram calculados como 0,058 e 0,0015 mM; 0,0078 e 0,057 EU/ml respectivamente.